大发3dLogo

热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

山东博科
现在位置首页>实验试剂制品>核酸纯化>DNA提取纯化>EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆
EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆
EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆
  • EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆

EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆

产品报价:300元

更新时间:2020/3/24 9:00:49

地:北京

牌:金克隆

号:EX1120

厂商性质:

公司名称: 金克隆(北京)生物大发3d有限公司

产品关键词: 质粒大提   质粒大量提取   金克隆   质粒提取  

36
访问人数
0
累计评论


黄晶丽 : (13341101640) (01059770309)

(联系我时,请说明是在大发3d上看到的,谢谢!)


质粒大提试剂盒说明书

货号:EX1120

规格:10T

保存:常温保存,复检期一年

试剂盒内容:EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆

试剂盒组成

10T

保存温度

RNaseA (10mg/ml)

1ml

-20

溶液

60ml

RT

溶液

60ml

RT

溶液

80ml

RT

漂洗液

2×15ml

RT

洗脱液

30ml

RT

吸附柱

10

RT

收集管(50ml)

10

RT

 产品简介:EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA 离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,一般从50-100ml大肠杆菌LB培养液中,可快速提取200-300μg高纯度高拷贝的质粒DNA,提取率达85-90% 使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。溶液在使用前先加入RNaseA(将试剂盒中提供的 RNaseA 全部加入),混匀,置于 2-8保存。如非指明,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤:EX1120-10T 质粒大量提取试剂盒 金克隆

1、  收集50-100ml过夜培养的菌液11000rpm离心10分钟,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)

2、  向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml溶液 (请先检查是否已加入RNaseA) ,使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。注意:如果菌块未彻底混匀,会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、  向离心管中加入5ml溶液,温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。 注意:翻转一定要温和,以免污染细菌基因组DNA作用时间不要超过5分钟,以免质粒受到破坏。

4、  向离心管中加入7ml溶液,立即温和地上下翻转6-8次,充分混匀,此时会出现白色絮状沉淀(如菌液过多,可在此步放置5分钟,以尽可能的降解RNA)11000rpm离心10分钟,用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中,注意尽量不要吸出沉淀。

5、  注意:溶液加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。 如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。

6、  将上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中),室温放置2-3分钟,11000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中(如为提高得率,可将收集管中的液体加入吸附柱再次吸附一次)

7、  向吸附柱中加入8ml漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)11000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、  向吸附柱中加入6ml漂洗液,11000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

9、  11000rpm离心5min,将吸附柱敞口置于室温或50温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影晌后续的实验如酶切、PCR等。

10、            将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加1-2ml65水浴预热的洗脱液,室温放置5min11000rpm离心2min,收集质粒溶液用于后续实验。

11、            为了增加质粒的回收效率,可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中,室温放置5min 11000rpm离心2min

注意事项:

1、  使用前请先检查溶液和溶液是否出现混浊,如有混浊现象,可在37水浴中加热几分钟,待溶液恢复澄清后再使用。溶液、溶液和漂洗液使用后应立即拧紧盖子。

2、  洗脱缓冲液体积不应少于500ul,体积过小影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影晌,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围) pH值低于7. 0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20,以防DNA降解。

3、  如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用400-800ml过夜培养物,同时按照比例增加溶液、溶液和溶液的用量,吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。

4、  DNA浓度及纯度检测:得到的质粒DNA纯度与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。得到的DNA可用琼脂糖疑胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA40μg/ml单链DNAOD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响吸光值,但并不表示纯度低。

EX1110

质粒小量提取试剂盒

EX1113

无内毒素质粒小量提取试剂盒

EX1120

质粒大量提取试剂盒

EX1123

无内毒素质粒大量提取试剂盒

EX1210

革兰氏阳性菌质粒小量提取试剂盒

EX1220

革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒

EX1310

酵母质粒提取试剂盒

EX1100

革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒   

EX1150

细菌基因组DNA提取试剂盒

EX1300

酵母基因组DNA大量提取试剂盒   

EX1350

酵母基因组DNA提取试剂盒

EX1355

真菌基因组DNA提取试剂盒

EX1450

植物基因组DNA提取试剂盒

EX1550

动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

EX1650

全血基因组DNA提取试剂盒

EX1652

全血基因组DNA提取试剂系统

EX1750

土壤基因组DNA提取试剂盒

EX1752

粪便基因组DNA提取试剂盒

EX1754

DNA病毒基因组提取试剂盒

EX1784

RNA病毒基因组提取试剂盒

EX1850

通用基因组DNA提取试剂盒

EX0108

DNA提取液(25:24,pH>7.8

EX0118

DNA提取液(125:24:1,pH>7.8

EX1800

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

EX1802

聚丙烯酰胺凝胶DNA回收试剂盒

EX1804

DNA产物纯化试剂盒