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EX1784-50T 动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 金克隆
EX1784-50T 动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 金克隆
  • EX1784-50T 动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 金克隆

EX1784-50T 动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 金克隆

产品报价:700元

更新时间:2020/3/24 9:25:44

地:北京

牌:金克隆

号:EX1784

厂商性质:

公司名称: 金克隆(北京)生物大发3d有限公司

产品关键词: DNA/RNA病毒基因组提   病毒基因组提取   金克隆  

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黄晶丽 : (13341101640) (01059770309)

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动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒

货号EX1784

规格:50T/100T

保存:室温(15℃-25℃)干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2℃-8℃。裂解液需-20℃保存。

产品内容:EX1784-50T 动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 金克隆

试剂盒组成

EX1784-50T

EX1784-100T

裂解液

1.5ml

1.5ml×2

洗柱液

50ml

50ml×2

结合液

25ml

50ml

漂洗液

15ml

15ml×2

RNase free   ddH2O

15ml

15ml×2

RNase free吸附柱

50

100

RNase free收集管(2ml)

50

100

产品简介:EX1784-50T 动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 金克隆

本试剂盒既适合从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA/RNA病毒基因组,同时也适合从动物组织匀浆液中快速提取高纯度的病毒基因组。试剂盒提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提,也无需进行耗时的醇类沉淀,获得的核酸可直接用于PCR/RT-PCRSorthern杂交/Northern杂交、以及LAMP/RT-LAMP等系列下游实验。

操作步骤:EX1784-50T 动物DNA/RNA病毒基因组提取试剂盒 金克隆

使用前请先在漂洗液中加入65mL新开启的无水乙醇,盖好摇匀。所有离心步骤均在2-8条件下进行

(一)从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA/RNA病毒基因组

1、  取病毒上清液0.5mL12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀(如无沉淀可省去此步)。

2、  向病毒上清中加入30μL 10mg/ml的裂解液,充分混匀,65℃消化10min,期间可颠倒离心管混匀数次。

3、  吸附柱前处理:从包装中取出吸附柱,放入收集管中,加入700μL 洗柱液,室温放置2分钟,2-8 12000 rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中待用。

4、  向病毒上清中加入500μL结合液,充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响RNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。(吸附柱的最大容积为750μL,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)

5、  12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、  向吸附柱中加入700μL 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、  向吸附柱中加入500μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、  12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

9、  将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50μL-100μL65℃水浴预热的RNase free ddH2O,室温放置5min12000rpm离心2min。即可得高质量的病毒基因组。

(二)从动物组织匀浆液中提取DNA/RNA病毒基因组

1、  取适量待检新鲜样品组织加入1~5倍体积的生理盐水进行匀浆。

2、  0.5mL匀浆液中加入30μL10mg/ml的裂解液,充分混匀,65℃消化10min,期间可颠倒离心管混匀数次,12000 rpm离心3 min,取上清。

3、  吸附柱前处理:从包装中取出吸附柱,放入收集管中,加入700μL 洗柱液,室温放置2分钟,2-8 12000 rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中待用。

4、  向匀浆上清中加入500μL结合液,充分混匀。再向管中加入400μL无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响RNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。(吸附柱的最大容积为750μL,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)

5、  12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6、  向吸附柱中加入700μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、  向吸附柱中加入500μL漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、  12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

9、  将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50μL-100μL65℃水浴预热的RNase free ddH2O,室温放置5min12000rpm离心2min。即可得高质量的病毒基因组。

注意事项:

1、  经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。

2、  样品应避免反复冻融,否则会导致提取的RNA提取量也下降。

3、  若结合液中有沉淀,可在37水浴中重新溶解。

4、  如果样品消化不彻底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。

5、  洗脱缓冲液的体积最好不少于50μL,体积过小会影响回收效率。

6、  RNA产物应保存在-70,以防RNA降解。

7、  RNA检测:得到的基因组RNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA,所以常规电泳无法检测,只有后期实验才可检测到。D260值为1相当于大约40μg/ml单链RNA