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EX1850-50T 通用基因组DNA提取试剂盒 金克隆
EX1850-50T 通用基因组DNA提取试剂盒 金克隆
  • EX1850-50T 通用基因组DNA提取试剂盒 金克隆

EX1850-50T 通用基因组DNA提取试剂盒 金克隆

产品报价:300元

更新时间:2020/3/24 9:30:07

地:北京

牌:金克隆

号:EX1850

厂商性质:

公司名称: 金克隆(北京)生物大发3d有限公司

产品关键词: 基因组DNA提取   金克隆   基因组DNA   DNA提取  

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通用基因组 DNA 提取试剂盒使用说明书

货号:EX1850

规格:50T/ 100T

保存:室温(15-25) 干燥保存,复检期 12 个月,2-8℃保存时间更长。开封后请将 RNase A,蛋白酶 K-20℃保存。

试剂盒内容:EX1850-50T 通用基因组DNA提取试剂盒 金克隆


50T

100T

RNase A

1ml

1ml×2

蛋白酶K

1ml

1ml×2

溶液A

25ml

50ml

溶液B

25ml

50ml

漂洗液

15ml

15ml×2

洗脱液

15ml

30ml

吸附柱

50

100

收集管

50

100

说明书

1

1

 产品简介:EX1850-50T 通用基因组DNA提取试剂盒 金克隆

本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。

使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR 、文库构建、Southern 杂交等实验。

操作步骤:EX1850-50T 通用基因组DNA提取试剂盒 金克隆

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、样品的处理:

1)土壤:称取0.1-0.3g (根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3 次,使土壤颗粒研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

2)粪便:称取0.1-0.3g (根据干湿) 粪便,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

3)昆虫:称取0.1-0.3g昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复3次,使昆虫研成粉末,加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

4)未知样品,如为细未状,可直接称取0.1-0.3g(根据干湿)500ul溶液A,如为块状,可0.1-0.3g用液氮研磨成粉未,再加500ul溶液A,振荡至彻底悬浮。

2、向悬浮液中加入20ul 10mg/mlRNase A55℃放置10min

3、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,55℃水浴消化,30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000转离心10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。

4、加入500ul溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,于55℃放置5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。

5、加入500ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置2min (分两次加入,每次700ul)

612000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中

912000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min12000rpm离心2min

11、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA.

注意事项:

1、由于样品不同,最终提取的DNA含量和纯度也有所不同,一般来说,如果所提取DNA用电泳的方法检测不到,PCR会有结果,样品尽可能的新鲜。否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

2、若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。

3、如果样品消化不彻底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)pH值低于7.0会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

5DNA浓度及纯度检测(浓度较高时):得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰, OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA40μg/ml单链DNAOD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

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