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Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) 11139ES60
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) 11139ES60
  • Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) 11139ES60

Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) 11139ES60

产品报价:1303元

更新时间:2019/11/12 17:38:14

地:上海

牌:翊圣生物

号: 11139ES60

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司

产品关键词: Hifair® III 1st Strand cDNA Sy   gDNA去除   gDNA digester抑制剂  

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翊圣生物 : (13916792673) (400-6111-883)

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Hifair? III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hifair? III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

11139ES60

100 T

1303.00

产品描述

Hifair? III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有gDNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair? III Reverse Transcriptase而开发。该酶cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair? III Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达19.8 kbcDNA

该试剂盒包含gDNA digester Mix,可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供cDNA合成引物:Random Primers N6oligo (dT)18和优化过的Primer Mix,用户可根据需要,选择Primer MixRandom Primers N6Oligo (dT)18Gene Specific Primers作为逆转录引物,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

产品组分

编号

组分

产品编号规格

11139ES60 (100 T)

11139-A

RNase free ddH2O

1 mL×2

11139-B

5×gDNA digester Mix

300 μL

11139-C

5×Hifair? III Super Mix

400 μL

11139-D

Primer Mix

100 μL

11139-E

Random Primers N6 (50uM )

100 μL

11139-F

Oligo (dT)18 (50 μM)

100 μL

【注】:15×Hifair? III Super Mix 包含gDNA digester抑制剂dNTPRNase inhibitor

                2)Primer Mix包含优化配比的Oligo (dT)18 和 Random Primers N6。

运输与保存

干冰运输。-20保存,有效期18个月。

注意事项

1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染

2)建议RNA是溶于水而不是TE因为TE会干扰gDNA去除以及逆转录反应

35×gDNA digester Mix5×Hifair? III Super Mix使用前请轻轻上下颠倒混匀,并小心离心至底部。吸取液体时请使用量程合适的移液器,枪头不要插入液面下过深。

4qPCR 实验推荐基因组去除步骤,保证结果更加真实可靠。

关于逆转录引物的选择

1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA 

2)原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。

3qPCR实验,请优先选择Primer Mix


第一链cDNA合成操作步骤

一、后续试验为qPCR

1.gDNA 消化

RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42孵育2 min

组分

使用量

RNase free ddH2O

To 15 μL

 gDNA digester Mix

3 μL

模板RNA

Total RNA: 10pg -5 μgmRNA: 10pg-500 ng

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

15 μL

5×Hifair? III Super Mix

4 μL

Primer Mix  

1 μL

or Random Primers N6 (50 μM)

or 1 μL

or Oligo (dT)18 (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

or 1 μL

or 1 μL

【注】1)逆转录引物:荧光定量实验推荐使用Primer Mix

 2)建议先加入5×Hifair? III Super Mix混匀后再添加反转录引物,以保证完全抑制gDNA digester的活性。

 3)逆转录前,请用移液器轻轻吹打混匀。

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25

5 min

55℃

15 min

85

5 min

】:逆转录温度:推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60

4. 逆转录产物可以-20短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80保存,避免反复冻融。

二、后续试验为PCR

1. RNA模板变性

RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。65℃孵育5 min,迅速置于冰上,并静置3min

组分

使用量

RNase free ddH2O

To 12 μL

模板RNA

Total RNA: 10pg -5 μgmRNA: 10pg-500 ng

2.gDNA 消化

RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42孵育2 min

组分

使用量

上一步的反应液

12 μL

 gDNA digester Mix

3μL

【注】若无需进行gDNA消化,推荐将逆转录引物加入到第1RNA模板变性的体系中,最后补齐总体系为16μL,反应结束后加入4 μL 5×Hifair? III Super Mix进行逆转录反应。

 

 

3. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

15 μL

5×Hifair? III Super Mix

4 μL

Random Primers N6 (50 μM)

1 μL

or Oligo (dT)18 (50 μM)

or Gene Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1 μL

【注】1)建议先加入5×Hifair? III Super Mix混匀后再添加反转录引物,以保证完全抑制gDNA digester的活性。

        2)逆转前,请用移液器轻轻吹打混匀。

4. 逆转录程序设置

温度

时间

25

5 min

55℃

30 min

85

5 min

】:1逆转录温度:推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60

       2)可将逆转录时间延长到45-60min,有助于提高产量。

5. 逆转录产物可以-20短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80保存,避免反复冻融。

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