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Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) 11139ES60
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) 11139ES60
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Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) 11139ES60

产品报价:1303元

更新时间:2020/7/9 17:23:52

地:上海

牌:翊圣生物

号:11139ES60

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司

产品关键词: Hifair® III 1st Strand cDNA Sy   gDNA去除   gDNA digester抑制剂  

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翊圣生物 : (13916792673) (400-6111-883)

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Hifair? III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hifair? III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)

11139ES60

100 T

1303.00

产品描述

Hifair? III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有gDNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair? III Reverse Transcriptase而开发。该酶cDNA合成速度快,且热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair? III Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可合成长达19.8 kbcDNA

该试剂盒包含gDNA Digester Mix,可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物:Random Primers N6oligo (dT)18,用户可根据需要,选择Random Primers N6Oligo (dT)18Gene Specific Primers作为逆转录引物,合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

产品组分

编号

组分

11139ES60 (100 T)

11139-A

RNase-free ddH2O

1 mL×2

11139-B

5×gDNA Digester Mix

300 μL

11139-C

10×Hifair? III Super Buffer1

200 μL

11139-D

Hifair? III RT Enzyme Mix2

100 μL

11139-E

Random Primers N6 (50 μM )

100 μL

11139-F

Oligo (dT)18 (50 μM)

100 μL

】:1) 10×Hifair? III Super Buffer 包含gDNA digester抑制剂和dNTPs 

    2) Hifair? III RT Enzyme Mix 包含RNase inhibitor

运输与保存

冰袋运输。-20℃保存,有效期18个月。

注意事项

1)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染。

2)建议RNA是溶于水而不是TE中,因为TE会干扰gDNA去除以及逆转录反应。

35×gDNA Digester Mix10×Hifair? III Super BufferHifair? III RT Enzyme Mix使用前请轻轻上下颠倒混匀,并小心离心至底部。吸取液体时请使用量程合适的移液器,枪头不要插入液面下过深。

4qPCR实验推荐基因组去除步骤,保证结果更加真实可靠

关于逆转录引物的选择

     1) 如果模板为真核生物来源,建议选择Oligo (dT)18 ,与真核生物mRNA3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA

     2)原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。

   3Random Primers N6适用性较广,适用于mRNArRNAtRNAsmall RNALncRNA等模板。


第一链cDNA合成操作步骤

一、若实验需要去除残留基因组DNA

1. gDNA消化

RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min

组分

使用量

RNase-free ddH2O

To 15 μL

5×gDNA Digester Mix

3 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μgmRNA: 10 pg-500 ng

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量μL

上一步的反应液

15

10×Hifair? III Super Buffer

2

Hifair? III RT Enzyme Mix

1

Random Primers N6 (50 μM)

1

or Oligo (dT)18 (50 μM)

or 1

or Gene Specific Primer (2 μM)

or 1

RNase-free ddH2O

to 20

【注】:1)逆转录引物:后续进行qPCR推荐Random Primers N6Oligo (dT)18 1:1混合使用。

2)建议先加入10×Hifair? III Super Buffer混匀后再添加逆转录引物,以保证完全抑制gDNA Digester的活性。

3)体系配制完成后,请用移液器轻轻吹打混匀。

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25

5 min

551

15 min2

85

5 min

】:1逆转录温度:推荐使用55。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60

2)逆转录时间:后续进行qPCR时,推荐15 min;若后续用于PCR时,推荐30 min-60 min

4. 逆转录产物可以-20短期保存,若需长期保存,建议分装后,-80保存,避免反复冻融。

二、若实验无需去除基因组DNA

1. RNA模板变性

RNase-free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。65℃孵育5 min,迅速置于冰上,并静置3 min

组分

使用量

RNase-free ddH2O

To 17 μL

模板RNA

Total RNA: 10 pg -5 μgmRNA: 10 pg-500 ng

Random Primers N6 (50 μM)

1 μL

or Oligo (dT)18 (50 μM)

1 μL

or Gene Specific Primer (2 μM)

or 1 μL

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

17 μL

10×Hifair? III Super Buffer

2 μL

Hifair? III RT Enzyme Mix

1 μL

【注】体系配制完成后,请用移液器轻轻吹打混匀。

3. 参照上述程序进行后续上机实验。

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