大发3dLogo

热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

山东博科
现在位置首页>实验试剂制品>细胞生物学检测>细胞增殖>Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒 40203ES60
Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒 40203ES60
Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒 40203ES60
  • Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒 40203ES60

Cell Counting Kit(CCK-8)试剂盒 40203ES60

产品报价:150元

更新时间:2019/10/14 8:41:36

地:上海

牌:翊圣生物

号: 40203ES60

厂商性质: 生产型,贸易型,服务型,

公司名称: 上海翊圣生物科技有限公司

产品关键词: 40203ES60   WST-8属于MTT的升级产品   广泛应用于细胞增殖和细胞毒   CCK   MTT   cell counting kit   cck-8  

1171
访问人数
0
累计评论


翊圣生物 : (13916792673) (400-6111-883)

(联系我时,请说明是在大发3d上看到的,谢谢!)


Cell Counting KitCCK-8)试剂盒

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

40203ES60*

100 T

150.00

Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

40203ES76*

500 T

480.00

Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

40203ES80*

1000 T

920.00

Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

40203ES88*

1000 T

1833.00

Cell Counting KitCCK-8CCK-8试剂盒

40203ES92*

10×1000 T

5122.00

检测原理

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

保存条件

4℃干燥避光保存,有效期一年(推荐)。-20℃干燥避光保存,有效期二年。

CCK-8方法的优势

1)表1 CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法

MTT

XTT

WST-1

CCK-8

甲臜产物的水溶性

差(需加有机溶剂溶解后再检测)

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600 nm

420-480 nm

420-480 nm

430-490 nm

细胞毒性

高,细胞形态完全消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

 

2)酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰;

3)细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。

注意事项

1)建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。

2)有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基液面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

3)白细胞可能需要培养较长时间。

4)如果没有450 nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

5)培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

CCK-8试剂盒操作说明

. 制作标准曲线(测定细胞具体数量)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养1-4 h后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

【注】当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 /(100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 /(100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

. 细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100 μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃5% CO2)。

2、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

5若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1MHCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

. 细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配制100 μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃5% CO2)。

2、向培养板中加入10 μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6122448小时)。

4、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1MHCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。

【注】如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

活力计算

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

 

 

 

HB190726