大发3dLogo

热门词:生物显微镜 水质分析仪 微波消解 荧光定量PCR 电化学工作站 生物安全柜

现在位置首页>大发3d资料首页>行业动态>新品动态>翊圣出品▏新冠肺炎RT-PCR检测试剂开发策略

翊圣出品▏新冠肺炎RT-PCR检测试剂开发策略

上海翊圣生物科技有限公司2020年3月11日 11:17 点击:119

翊圣出品▏新冠肺炎RT-PCR检测试剂开发策略

从武汉肺炎爆发以来,翊圣生物积极参与其中,基于长期储备的分子酶双向改造、蛋白发酵纯化和高效抗体筛选大发3d平台,翊圣生物已储备有2000多万份新型冠状病毒检测试剂盒酶原料,可日组装40万次新型冠状病毒核酸检测试剂盒!现在我们总结武汉肺炎诊断试剂盒(RT-PCR法)中的核心原料的开发策略,供读者参阅。

 

一、开发目的:

利用中国CDCWHO指导文件中相关基因的引物和探针,依次验证质粒标准品、假病毒标准品,筛选出适合新冠病毒的RNA扩增试剂。

二、开发策略:

1. 模拟测试质粒标准品样本

将检测灵敏度和特异性作为RT-PCR探针法检测试剂的核心指标,筛选出了灵敏度至少达到10 copies (20 μL反应体系),高特异性判别新冠病毒ORF1abN geneE gene的候选配方

1583939064(1).jpg 

1. SARS-CoV-2 ORF1abN gene质粒为模板,模板投入量107-101拷贝数,采用CDC建议引物和探针,进行单管多重扩增检测。在此过程中,根据引物和探针属性,优化扩增程序。

 

1583939292(1).jpg 

2. SARS-CoV-2 ORF1ab质粒,E gene PCR产物为模板,模板投入量107-101拷贝数,采用WHO建议引物和探针,进行单管多重扩增检测。在此过程中,根据引物和探针属性,优化扩增程序。

 

 

2. 模拟测试假病毒标准品样本

模拟新冠病毒样本核酸提取到扩增全流程,筛选出了假病毒样本灵敏度至少达到103 copies/mL (25 μL反应体系)的配方

1583939362.jpg 

3. SARS-CoV-2 ORF1abN gene假病毒为模板模板投入量107-103 copies/mL,采用中国CDC建议引物和探针,进行单管多重扩增检测。

 

3. 试剂稳定性测试

将试剂保存条件的容忍度和批次稳定性作为试剂稳定性的评估指标,测定该配方批次间和批次内CV5%,可反复冻融次数50次,4℃,25℃保存一周,性能无变化,保证了质量稳定可靠。

1583939477(1).jpg 

4. 生产批次:H1029950。以SARS-CoV-2 ORF1abN gene假病毒为模板模板投入量107-103 copies/mL,进行单管多重扩增检测,比较Ct值和扩增曲线线型。

 1583939542(1).jpg

 

5. 生产批次:H1029950H1029920H1025890。以SARS-CoV-2 ORF1abN gene假病毒为模板模板投入量107-103 copies/mL,进行单管多重扩增检测,比较Ct值和扩增曲线线型。

1583939605(1).jpg 

 

6. SARS-CoV-2 ORF1abN gene假病毒为模板模板投入量106-103 copies/mL,进行单管多重扩增检测,比较4℃、25℃保存1-7天后Ct值和扩增曲线线型。

1583939656(1).jpg 

7. SARS-CoV-2 ORF1abN gene假病毒为模板模板投入量106-103 copies/mL,进行单管多重扩增检测,比较反复冻融50次处理后Ct值和扩增曲线线型。

三、RT-PCR检测试剂盒:Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

至此,即开发出基于多重荧光RT-PCR原理,可以以冠状病毒RNA为模板进行多重定量PCR反应的定量试剂,并作为新型冠状病毒核酸检测试剂盒的核心组分,用于试剂盒组装。1583939680(1).jpg

 

 

产品信息

产品名称

货号

规格

Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

13110ES60

100 T

Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

13110ES80

1000 T

Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit

13110ES92

10000 T

搭配UDGase/dUTP,可预防气溶胶污染产品如下

产品名称

货号

规格

Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)

13111ES60

100 T

Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)

13111ES80

1000 T

Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG plus)

13111ES92

10000 T

HB200225

 


(来源: 上海翊圣生物科技有限公司


全年征稿 / 资讯合作

联系邮箱:kefu@labbase.net

版权与免责声明

  • 凡本网注明“来源:大发3d”的所有作品,版权均属于大发3d,转载请必须注明大发3d, http://qe3c.com,违反者本网将追究相关法律责任。
  • 本网转载并注明自其它来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
  • 如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。