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免疫治疗新靶点--TNFR2

北京百奥赛图基因生物大发3d有限公司2020年3月13日 10:25 点击:150


在这个草长莺飞的春天,是否记得那句“要想富,多栽树”的宣传标语?今天的植树节,百奥赛图知识拓展课堂携智慧树如期而至,与您携手探寻TNFR2。
 

基本信息



因功能简介


TNFRSF1B(TNF receptor superfamily member 1b) 为TNF受体超家族成员, 也称为TNFR2,主要表达在肿瘤微环境中的Treg细胞和多种肿瘤细胞中(如卵巢癌和肠癌)。其配体TNF主要识别TNFR1进行凋亡,依赖TNFR2进行与T细胞存活相关的功能——通过NF-κB信号促进pro-survival基因的转录,从而促进细胞增殖和生存。许多实验表明阻断型抗体可以特异性杀伤肿瘤微环境中的Treg细胞和肿瘤细胞,用于治疗多种肿瘤;而激活型抗体可以激活Treg细胞,进而抑制Teff细胞,从而治疗自身免疫疾病,为免疫治疗提供了新的靶点。


信号通路


TNFR1和TNFR2介导了不同的信号和作用[1]


 表型分析


 

B-hTNFR2小鼠mRNA表达分析



通过RT-PCR对WT和B-hTNFR2小鼠中TNFR2基因表达进行品系特异性分析。在C57BL/6小鼠中可检测到mTNFR2 mRNA,而hTNFR2 mRNA仅在B-hTNFR2纯合鼠中检测到。

 


采用RT-qPCR对WT和B-hTNFR2小鼠的TNFR2基因表达进行品系特异性分析。

B-hTNFR2纯合鼠中hTNFR2的mRNA表达与野生鼠C57BL/6相似,说明用B-hTNFR2小鼠人源化小鼠模型并没有改变TNFR2蛋白的表达水平。

 


B-hTNFR2小鼠蛋白表达分析



通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠中TNFR2蛋白表达进行分析。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠,收集脾细胞,并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示:在C57BL/6小鼠B细胞表面检测到mTNFR2,在B-hTNFR2纯合鼠B细胞表面检测到hTNFR2。



通过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠中TNFR2蛋白表达进行分析。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠,收集脾细胞,并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示:在C57BL/6小鼠T细胞表面检测到mTNFR2,在B-hTNFR2纯合鼠T细胞表面检测到hTNFR2。

 

过流式细胞术对野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠中TNFR2蛋白表达进行分析。用抗小鼠CD3ε抗体体内刺激野生型C57BL/6和B-hTNFR2纯合鼠,收集脾细胞,并用种属特异性抗TNFR2抗体进行流式细胞术分析。结果显示:在C57BL/6小鼠Treg细胞表面检测到mTNFR2,在B-hTNFR2纯合鼠Treg细胞表面检测到hTNFR2。

 

B-hTNFR2小鼠的白细胞亚群分析



 

从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠(n=3)中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。

结果表明,纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似,hTNFR2的人源化不影响T,B,NK,粒细胞,单核细胞,DC和巨噬细胞的分化。


从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠(n=3)中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。结果表明,纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似,hTNFR2的人源化不影响CD45细胞中mCD4、mCD8以及T细胞中mCD4、mCD8的分化。


从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠(n=3)中分离出淋巴结细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。结果表明,纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似,hTNFR2的人源化不影响T,B,NK细胞的分化。



从C57BL/6和B-hTNFR2小鼠(n=3)中分离出淋巴结细胞。通过流式细胞术测试白细胞亚群的比例。结果表明,纯合B-hTNFR2小鼠中白细胞亚群的表达谱与C57BL/6小鼠相似,hTNFR2的人源化不影响CD45细胞中mCD4、mCD8以及T细胞中mCD4、mCD8的分化。

 

TNFR2抗体与B-hTNFR2纯合鼠T细胞结合分析



从B-hTNFR2小鼠(n=3)中分离出脾细胞。通过流式细胞术测试TNFR2抗体与脾细胞的结合。

从anti-mCD3ε(0.2或1μg/mL)和anti-mCD28(1μg/mL)体内刺激的B-hTNFR2小鼠分离出脾细胞。单个活细胞用CD45圈门后用于进一步的分析。如图所示,与同型对照抗体(hIgG)相比,hTNFR2 Ab2与B-hTNFR2纯合鼠的T细胞是结合的。在anti-mCD3ε(0.2μg /mL)刺激条件下,mTNFα增强了hTNFR2 Ab2与B-hTNFR2纯合鼠的T细胞结合,这表明mTNFα/hTNFR2信号通路在B-hTNFR2纯合鼠中是可行的。

 

TNFR2抗体药效验证



将鼠结肠癌MC38细胞皮下植入纯合的B-hTNFR2小鼠中,当肿瘤体积达到约100 mm3时,对小鼠进行分组,然后使用抗人类TNFR2抗体进行治疗。与对照组相比,两种人TNFR2抗体以不同程度抑制肿瘤生长,证实B-hTNFR2小鼠模型是体内TNFR2抗体药理功效研究的有力工具。(A)肿瘤平均体积±SEM,(B)小鼠平均体重±SEM。


参考资料


[1]Faustman D, Davis M. TNF receptor 2 pathway: drug target for autoimmune diseases. Nat Rev Drug Discov 2010, 9(6): 482-493.

[2]Torrey H, Butterworth J, Mera T, Okubo Y, Wang L, Baum D, et al. Targeting TNFR2 with antagonistic antibodies inhibits proliferation of ovarian cancer cells and tumor-associated Tregs. Sci Signal 2017, 10(462).


今天的知识拓展课堂到此结束,更多精彩内容,敬请期待~



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(来源: 北京百奥赛图基因生物大发3d有限公司


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