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烟花三月——B-hCD3E人源化小鼠百变大咖秀

北京百奥赛图基因生物大发3d有限公司2020年3月20日 11:24 点击:269


由于CD3与T细胞的激活密切相关,因此,对于该靶点的抗体研发层出不穷,其中包括CD3E单特异性及双特异性抗体。基于此,百奥赛图开发了CD3E人源化小鼠( B-hCD3E mice ),用于各类抗体的体内药效评价。


 

B-hCD3E mice数据内容包含:

基因编辑策略

纯合小鼠人源CD3E蛋白流式表达分析

纯合小鼠T细胞激活功能流式分析

CD3E单特异性抗体体内药效评价及给药后T,B细胞清除流式分析

Blinatumomab双抗体内药效评价

CD3E 双抗体内药效评价

CD3-hEpCAM双抗体内药效评价


基因功能简介


CD3e( CD3e molecule)编码CD3-epsilon多肽,与 CD3-γ、-δ 和-ζ以及 T 细胞受体 α/β 或 γ/δ 异二聚体共同构成TCR-CD3复合物。此复合物是 T 细胞上常见的表面标记物,不仅作为形成 T 细胞受体 (TCR)-CD3 复合物的必需成分,而且作为外部信号转导因子具有重要功能,是调节T细胞功能的靶分子之一。CD3-epsilon多肽在 T 细胞发育中起重要作用,该基因的缺陷将导致免疫缺陷。

 

TCR-CD3 复合物及其信号通路[1]


 基本信息



 基因编辑策略


 


 

B-hCD3E纯合小鼠人源CD3E蛋白表达分析


 

 

分离C57BL/6和B-hCD3E小鼠(n=3)脾细胞,流式检测hCD3E蛋白表达情况。

结果表明:野生型 C57BL/6 小鼠中可检测到mCD3蛋白表达,纯合B-hCD3E小鼠中只检测到hCD3蛋白表达。


 纯合小鼠T细胞激活功能流式分析


 


分离C57BL/6 和 B-hCD3E纯合小鼠 (n=4) 脾脏中的 T 细胞,与抗 CD3 抗体孵育 24h,流式检测 T 细胞增殖情况。

结果显示:抗 hCD3 抗体特异性活化 B-hCD3E纯合小鼠的T 细胞,且其活化水平与抗 mCD3 抗体处理的 C57BL/6小鼠相似,表明胞外区人源化改造对B-hCD3E纯合小鼠T细胞的活化无明显影响。


 CD3E单特异性抗体体内药效评价


 

C57BL/6(A) 和B-hCD3E纯合小鼠(B)接种MC38,待肿瘤体积约150±50mm3 后分组(n=5),结果显示:两种小鼠模型中,mPD-1抗体均显著抑制肿瘤生长,表明:胞外区人源化改造对B-hCD3E纯合小鼠T细胞的胞内信号传递无明显影响。

同时,hCD3E抗体显著促进B-hCD3E小鼠肿瘤生长,而对C57BL/6小鼠肿瘤的生长基本无影响。进一步研究表明:给药(hCD3E抗体)后出现AICD效应,B-hCD3E小鼠T细胞被清除,进而促进肿瘤生长。


 CD3E单特异性抗体给药后T,B细胞清除流式分析


 

流式检测给药后小鼠血液中 B 细胞和 T 细胞的比率。给药后 48 小时,从外周血中分离淋巴细胞。抗 hCD3 抗体治疗组由于 CD3E 抗体治疗引起的活化诱导细胞死亡 (AICD) 效应,T 细胞比例明显下降。而抗 mPD-1 抗体组 T 细胞比例无明显变化。 

(A)与hIgG Ab相比,CD19+细胞各组间无显著性差异。(B)与hIgG Ab相比,h-CD3 Ab治疗后血液中TCR-β百分比显著降低。(C) 与 hlgG Ab 相比,血液中 hCD3 Ab 处理后CD4+百分比下降。(D) 与 hlgG Ab 相比,血液中 hCD3 Ab 处理后 CD8+百分比下降。


 Blinatumomab双抗体内药效评价


接种MC38-hCD19至B-hCD3E纯合小鼠皮下,肿瘤组织接近150±50mm3时进行分组(n=6),注射高、中、低不同剂量的Blinatumomab。

结果表明:高剂量的hCD3E双特异性抗体能够有效抑制肿瘤生长。证明B-hCD3E 小鼠模型是hCD3E 双特异性抗体体内疗效评价的有力工具。A.肿瘤体积±SEM。B.小鼠平均体重±SEM。


 CD3E 双抗体内药效评价


 

B-hCD3E 小鼠中 CD3E双抗 的抗肿瘤疗效评价。(A) CD3E 双抗可有效抑制 B-hCD3E 小鼠肿瘤生长。(B) 小鼠体重变化。如图 A 所示,不同剂量的 CD3E双抗可有效控制 B-hCD3E 小鼠的肿瘤生长,证明B-hCD3E 小鼠模型是hCD3E 双特异性抗体体内疗效评价的有力工具。


 CD3-hEpCAM双抗体内药效评价


 

接种MC38-hEpCAM至B-hCD3E纯合小鼠皮下,肿瘤组织接近150±50mm3时分组进行体内药效评价实验。

结果显示:与对照组相比,抗人 CD3/hEpCAM 双特异性抗体具有中度抗肿瘤活性。数据还表明,抗鼠 CD4(一种 CD4 消耗抗体)可增强抗人 CD3/hEpCAM双特异性抗体的抗肿瘤活性。

 

参考文献

[1] Ngoenkam, J., Schamel, W. W., & Pongcharoen, S. (2017). Selected signalling proteins recruited to the T-cell receptor-CD3 complex. Immunology, 153(1), 42–50. doi:10.1111/imm.12809.

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(来源: 北京百奥赛图基因生物大发3d有限公司


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